Adenovirus tezkor testi-burun sekretsiyasi

Foydalanish maqsadi:

SARS-CoV-2 Nuklein kislotasi testi toʻplami nazofarengeal tamponlar, orofaringeal tamponlar va balgʻamda COVID-19 nuklein kislotasini sifatli aniqlash uchun qoʻllaniladi. Sinov natijalari infektsiya yoki shubhali bemorlar uchun molekulyar diagnostika uchun asos bo'lib xizmat qiladi va klinik tashxis uchun yagona mezon sifatida foydalanilmasligi kerak.

Materiallar:

Sinov tartibi:

A. Namuna tayyorlash

Ekstraksiya qilingan RNK SARS-CoV-2 nuklein kislotasi sinovi uchun boshlang‘ich materialdir.

Muhim: Nuklein kislotani olishning har bir protsedurasi bir vaqtning o'zida bitta musbat nazorat (40 mkl, steril fiziologik eritmalar/PBS bilan kerakli hajmgacha suyultiriladi) va bitta salbiy nazorat (40 mkl, steril fiziologik eritmalar/PBS bilan kerakli hajmgacha suyultiriladi) bilan bir vaqtda bajarilishi kerak.

Quyidagi tijoriy nuklein kislota ekstraktsiyasi to'plamlaridan foydalanish tavsiya etiladi: PureLinkTM Virusli RNK/DNK Mini Kit (Invitrogen); Virusli RNK Mini to'plami (QIAGEN); TIANamp Hi-DNK/RNK to'plami (TIANGEN);

B. Reaktsiya aralashmasini sozlash

1. Ishlatishdan oldin barcha reagentlar va namunalar to'liq eritilishi, to'liq aralashtirilishi va xona haroratida (taxminan 18 dan 25 darajagacha) qisqa vaqt davomida santrifüj qilinishi kerak.

2. Tegishli o'lchamdagi polipropilen mikrosentrifuga naychasida Reaktsiya aralashmasining kerakli hajmini tayyorlang.

3. Tegishli optik 96-quduq reaksiya plitasi yoki mos optik reaksiya trubkasining har bir kerakli qudug'iga 25 mkl Reaktsiya aralashmasini pipetka bilan soling.

C. Shablonni qo'shish

1. Namunalar/Ijobiy nazorat/Salbiy nazoratdan olingan 5 mL RNK qo'shing. Umumiy hajmi 30 mkl.

2. Yuqoriga va pastga pipetlash/Vortex orqali namunalar va nazorat elementlarini Reaktsiya aralashmasi bilan yaxshilab aralashtiring.

3. Tegishli qopqoqlar yoki optik yopishtiruvchi plyonka bilan 96-quduq reaksiya plitasini va tegishli qopqoqli reaksiya trubkalarini yoping.

4. 96-Quduq reaksiya plitasini mikrotitrli plastinka rotorli sentrifugada taxminan 2500 rpm tezlikda 30 soniya davomida santrifüj qiling.

D. Haqiqiy vaqtda PCR asbobini dasturlash

Turli real vaqtda PCR asboblarini sozlash va dasturlash bo'yicha asosiy ma'lumotlar uchun tegishli asbobning foydalanuvchi qo'llanmasiga qarang. Tahlil ABI7500 Real-Time PCR tizimi uchun optimallashtirilgan. PCR yugurishi quyidagi jadvalda tasvirlanganidek, velosipedda ishlash shartlari bilan amalga oshiriladi.

Floresan detektorlarini aniqlang

*Iltimos, asbobning lyuminestsent ichki moslamasini "Yo'q" ga o'rnating, masalan: ABI seriyali asboblar uchun "Passiv referent" ni "Yo'q" ga o'rnating.

E. Ma'lumotlarni tahlil qilish

Iltimos, tahlil parametrlarini o'rnating va tegishli asboblarning foydalanish ko'rsatmalariga muvofiq ma'lumotlarni tahlil qiling.

Misol tariqasida ABI 7500 ni oling:

Asosiy chiziqni kuchaytirishning dastlabki davrlarida topilgan fon floresansini yo'q qiladigan, lekin kuchaytirish signallari fondan yuqoriga ko'tariladigan maydonni bir-biriga yopishtirmaydigan diapazonga o'rnatish kerak (Boshlang'ich qiymat: 3 ~ 10; Yakuniy qiymat: {{2} }). Tsikl chegarasi (Ct) eksponensial fazaning bazasida bo'lishi kerak. Tahlil natijasini avtomatik ravishda olish uchun "Tahlil" tugmasini bosing va "Hisobot" oynasida aniqlash natijasini o'qing.

Issiq teglar: adenovirus tezkor test-burun sekretsiyasi, Xitoy, etkazib beruvchilar, ishlab chiqaruvchilar, zavod, ommaviy